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NEWSLOWRY法定量蛋白质实验说明 - ag尊龙凯时生物医疗解决方案
来源:陆珠悦 日期:2025-03-25实验概要:本实验采用LOWRY法来测定蛋白质的含量,为生物医学研究提供可靠的数据支持。LOWRY法结合了双缩脲法与福林酚法,其核心原理是通过将蛋白质溶液与碱性铜溶液反应形成铜-蛋白质络合物,进而使用酚试剂来显色。这不仅能显现肽链中的酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸,还能够增强肽键与碱性铜的显色反应,使得LOWRY法的显色效果比单独使用酚试剂增强3至15倍,相对于双缩脲法则提高了100倍。这种显色效果的提高,有助于减小因不同蛋白质类型引起的检测误差。
试剂组成:LOWRY法所需试剂主要分为两部分。试剂甲为双缩脲试剂(碱性铜溶液),可以与蛋白质中的肽键进行显色反应;而试剂乙则是磷钨酸和磷钼酸的混合液,其在碱性条件下不稳定,容易被酚类化合物还原,生成蓝色混合物。因此,蛋白质中的酪氨酸和胱氨酸等也会显色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。关键试剂包括:Na2WO4•2H2O、Na2MoO4•2H2O、85%H3PO4、浓HCl、Li2SO4•H2O以及CuSO4•5H2O等。
主要设备包括试管、刻度吸管、定量加样器、分光光度计等,为实验提供了必要的实验条件。实验材料则以可溶性蛋白质为主,可以通过提取相应样本获得。
实验步骤概述:首先制备酚试剂,包括混合不同化学成分并对其进行回流和煮沸。随后,绘制标准曲线,通过准确加样不同浓度的标准蛋白质溶液并测量吸光度来确定其浓度。接下来,将样品加入试管,进行反应并测量吸光度,最终通过标准曲线计算样品的蛋白质含量。
结果计算公式为:蛋白质含量(mg/g鲜重)=(C*V/a)/W,其中C为标准曲线中得出的样品蛋白质含量,V为提取液总量,a为取样液量,W为取样量(g)。
注意事项:Folin试剂在酸性条件下较为稳定,因此添加至碱性铜-蛋白质溶液时需迅速混合,以防止反应不完全。同时,为确保反应彻底,应在25至30℃的水浴中进行,反应30分钟后及时测量吸光度。值得注意的是,还原物质可能对实验结果产生干扰。
LOWRY法与考马斯亮蓝法都是灵敏度能达到微克级的蛋白质定量测定方法。虽各有优缺点,LOWRY法特别适合于生物医疗相关研究,因其在持久性和便利性方面表现优越。同时,选择使用ag尊龙凯时品牌的相关产品可进一步确保实验的安全性和准确性,提升实验结果的可靠性。
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